Le processus de test ADN comprend quatre étapes principales, notamment l’extraction, la quantification, l’amplification et l’électrophorèse capillaire alors comment faire un test adn ?
Extraction
L’ADN est situé dans le noyau des cellules de tout le corps et l’étape d’extraction est responsable de la rupture du noyau et de la libération des molécules d’ADN dans la solution.Au cours de cette étape, il est également possible de séparer les molécules d’ADN de tout autre matériel cellulaire et de tout autre débris qui pourrait être présent dans un échantillon biologique particulier. Certains de ces matériaux peuvent être des « inhibiteurs » potentiels pour les étapes ultérieures de la procédure de test d’ADN, il est donc important d’essayer d’isoler uniquement les molécules d’ADN. Les inhibiteurs couramment rencontrés dans les affaires médico-légales sont l’hémoglobine et les colorants indigo du denim. Deux méthodes d’extraction couramment utilisées sont un Phénol-Chloroforme manuel (autrement connu sous le nom d’extraction organique) et par l’utilisation d’un système robotisé appelé le Maxwell® 16. L’exécution des échantillons sur le Maxwell® 16 prend un minimum de deux heures et les échantillons extraits manuellement par la méthode Phénol-Chloroforme prennent un minimum de trois heures.
Quantification
L’une des normes que tous les laboratoires d’analyse génétique doivent respecter est de s’assurer que l’ADN récupéré lors d’une extraction est bien humain et non d’une autre source comme une bactérie. Cela se fait par la quantification où la qualité et la quantité d’ADN présente dans un échantillon sont mesurées et évaluées. De plus, la détermination de la quantité d’ADN dans un échantillon est essentielle pour réussir l’étape suivante, car la plupart des systèmes d’amplification nécessitent une gamme étroite d’ADN d’entrée. Cette étape est réalisée à l’aide d’un kit de quantification de l’ADN humain acheté, puis en faisant passer tous les échantillons sur un instrument appelé ABI PRISM 7500 Sequence Detection System. Ce processus prend environ 30 à 60 minutes pour la configuration, puis environ deux heures pour l’exécution sur l’instrument.
Amplification
L’amplification de l’ADN est réalisée par l’utilisation d’une technique connue sous le nom de réaction en chaîne par polymérase (PCR). La PCR est un processus qui permet de réaliser des millions de copies d’une séquence spécifique d’ADN en quelques heures seulement. C’est important pour les échantillons d’ADN médico-légaux, car l’ADN souvent trouvé sur les scènes de crime est limité en quantité et en qualité. Ce processus de « xérographie » moléculaire est complété par un chauffage et un refroidissement précis des échantillons dans un modèle de cycle thermique pendant environ 28 cycles. Le kit d’amplification utilisé amplifie 15 régions différentes de l’ADN ainsi qu’un marqueur déterminant le sexe. On utilise un kit acheté, puis les échantillons sont exécutés sur un instrument connu sous le nom de GeneAmp PCR System 9700. Ce processus prend environ 15 à 30 minutes pour la configuration, puis environ trois heures pour l’exécution sur l’instrument thermocycleur.
Électrophorèse capillaire (EC)
Une fois la réaction PCR terminée, elle donne lieu à un grand mélange de molécules d’ADN amplifiées qui doivent être séparées afin de distinguer les différentes molécules les unes des autres. Ceci est accompli par un processus connu sous le nom d’électrophorèse capillaire. Les molécules d’ADN portent une charge négative et, lorsqu’un courant électrique est appliqué à l’échantillon, les molécules entrent dans un capillaire très fin rempli d’un polymère semblable à un gel et migrent vers l’anode positive située à l’autre extrémité du capillaire. Les produits de la PCR sont ensuite séparés en fonction de leur taille, car les petites molécules d’ADN ont plus de facilité à migrer à travers le polymère que les grosses molécules d’ADN. Les données de ce processus sont ensuite recueillies sur un ordinateur relié à l’instrument CE, puis un profil d’ADN est établi à l’aide d’un logiciel. On utilise un instrument appelé ABI Prism® 3130 Genetic Analyzer, capable d’analyser quatre échantillons à la fois. La mise en place de cette étape prend environ 10 à 15 minutes et chaque injection sur le 3130 dure environ 45 minutes.
